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鸡红细胞的制备及储存方法介绍
更新时间:2018-09-26 点击次数:739次
鸡红细胞主要用于去除鸡红细胞中混杂的白细胞、细胞碎片及黏连红细胞,降低其在流式细胞仪上检测到的CV值。下面我们来说说鸡红细胞的制备及储存方法::
1.将收集到的肝素钠抗凝血在4°c下暂时保存,并尽快进行分离处理;
2.按照1:1的比例将静脉血与质量浓度为3-6%的明胶溶液混合,4°C下静置30-90min分层,并去除上层的白细胞;
3.将下层红细胞转移入eppendorf管中,用含0.15-0.38 g乙二胺四乙酸的稀释液按照适当比例将其稀释至1-5 X IO7 cells/mL, 150-300 rpm的低速离心,去除上层细胞碎片与血细胞;
4.将纯化后的鸡红细胞固定及保存于1-3%戊二醛溶液中,并将其终密度调整为1-2XIO7 cells/m ;
5.取固定后的鸡红细胞,每隔30 d用碘化丙啶染色,流式细胞仪检测其CV值,确定其可用性。
使用时常见问题及解决方法:
血清应保存在-5℃至-20℃;若存放于4℃时,请勿超过一个月。如果您一次无法用完一瓶,建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
欲去除絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
1.将收集到的肝素钠抗凝血在4°c下暂时保存,并尽快进行分离处理;
2.按照1:1的比例将静脉血与质量浓度为3-6%的明胶溶液混合,4°C下静置30-90min分层,并去除上层的白细胞;
3.将下层红细胞转移入eppendorf管中,用含0.15-0.38 g乙二胺四乙酸的稀释液按照适当比例将其稀释至1-5 X IO7 cells/mL, 150-300 rpm的低速离心,去除上层细胞碎片与血细胞;
4.将纯化后的鸡红细胞固定及保存于1-3%戊二醛溶液中,并将其终密度调整为1-2XIO7 cells/m ;
5.取固定后的鸡红细胞,每隔30 d用碘化丙啶染色,流式细胞仪检测其CV值,确定其可用性。
使用时常见问题及解决方法:
血清应保存在-5℃至-20℃;若存放于4℃时,请勿超过一个月。如果您一次无法用完一瓶,建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
欲去除絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
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