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古朵生物:常规切片的制作过程
发布时间:2019-01-02   点击次数:298次

【实验目的】
1. 了解常规切片的制作过程。
2. 熟悉苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色方法。

【实验原理】
将各种方法(活检、尸检)获取的组织标本经过一定的步骤处理,做成切片。苏木素是碱性染料,可将细胞核(嗜碱性物质)染成蓝色,伊红是酸性染料,可将多数细胞的细胞质(嗜酸性物质)染成红色,形成色彩鲜艳、结构清晰的组织图像。

【实验对象】
尸检来源的正常肺组织。

【实验药品与器材】
1. 器材 手术刀、恒温箱、石蜡切片机、显微镜。
2. 试剂 10%福尔马林,梯度酒精(70%、80%、90%、95%),无水酒精,二甲苯,包埋石蜡,苏木素染液,伊红染液。

【实验方法与步骤】
1. 取材和固定 用锋锐的手术刀细致而迅速地取下一块大小适宜(1.5×1.5×0.2 cm)的肺组织块,立即投入10%福尔马林内固定24 h,也可多放一段时间待用时取出(hao不要超过48h)。
2. 脱水 依次经过70%(2 h)、80%(2 h)、90%(2 h)、95%酒精(Ⅰ、Ⅱ 各2 h)和无水酒精(Ⅰ、Ⅱ各1 h)脱水,二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各1 h),以置换组织内的酒精溶液。
3. 包埋 将透明好的组织块置入已在温箱(58℃~60℃)内熔化的石蜡内(Ⅰ、Ⅱ 各2 h),使石蜡浸入组织并替换出二甲苯。在包埋器的内壁涂一层甘油,倾入熔化的石蜡,将浸透蜡的组织块放入包埋器(待切面朝下),摆好间距和方位,待蜡液表面凝固后,将包埋器投入冷水浴中,使石蜡冷却凝固。
4. 切片 将蜡块固定于切片机,切成5μm厚的切片,在45℃的水面上展平后捞在涂有防脱剂的载玻片上,置60℃烤箱2h。
5. 脱蜡 二甲苯脱蜡(Ⅰ、Ⅱ 各15min),不同浓度酒精(100%、95%、80%、70%)置换二甲苯并经蒸馏水水化后即可进行染色。
6. 苏木精-伊红染色 将经处理的组织切片置苏木素染液中染5min,自来水冲洗,稀盐酸分化后,置流水中充分冲洗返蓝;伊红染液染色2~3min,流水冲洗干净。
7. 脱水、透明和封固 染好的切片经梯度酒精脱水(70%、80%、95%、100%)各5min,二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ 各5 min),在载玻片上加一滴中性树胶,然后覆盖一片清洁的盖玻片。
8. 显微镜观察。


【注意事项】
1. 每取完一例标本后,所有的工具如刀、剪、盘、镊、切板等,必须用水冲洗干净,以免污染。
2. 尽量保持组织的原有形态,勿使组织块受挤压,切取标本的大小不超过2.0 cm×2.0 cm×0.2 cm。
3. 依据组织块大小确定脱水、透明和浸蜡时间。时间过长,组织块过硬、变脆;时间不够,则组织块硬度不够,且HE染色时核浆蓝染,界限不清,不利于观察。
4. 苏木素染后应充分返蓝,使细胞色彩鲜明,结构清晰。

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