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关于蛋白定量的N个问题,这篇帮您一一解答!
发布时间:2019-08-22   点击次数:50次

问1.同为蛋白定量产品,非标记定量和标记定量的适用场景有何差别?

标记定量分析技术可同时比较2-10组样品之间的蛋白组表达差异,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。而非标记定量技术不需要标记,定量样本数不受限制,其中蛋白DIA定量分析技术被《Nature Methods》杂志评为2015年最值得关注的技术之一,具有定量准确性高、技术重现高的优点。

 

两相比较之下,非标记定量DIA更适用于以下情况:

1)实验组数高于10组;
2)样本来源于不同物种、不同组织或不同部位,需进行平行蛋白组定量检测;
3)需要区分样本中的“有无蛋白”;
4)追求更精准的定性和定量效果,避免标记和液相分组引入的实验误差;
5)需要对采集的数据进行多次重挖掘分析。

两相比较之下,标记定量iTRAQ/IBT更适用于以下情况:

1)实验组数低于10组(即同时比较的样本数≤10);
2)样本背景较为相似(相同物种和相同的样本类型)。

这么看来,如果您的样本量>10,想不受限制地获得更为丰富和精准的数据,DIA将是更合适的选择

问2.蛋白定量研究结果的等待时间太长?

目前市面上常见的蛋白组定量产品的交付周期超过半月,为了给科学研究带来更ji致的体验,古朵生物推出了极速交付的蛋白组定量产品,从样本检测合格到数据产出,仅需13天!同时保证品质无损、价格更优。

问3. 如何保障蛋白定量的准确性?

除了追求鉴定数量和价格,定量准确才是硬道理。

问3.有哪些容易忽略的关键点会影响蛋白定量的准确性?

对于标记定量蛋白质组技术(iTRAQ/IBT/TMT),其优势在于将所需比较的样品标记后混在一起无偏好地同时进行后续实验和质谱检测,消除了系统实验误差,使得定量可比性更直接。但是,标记定量技术带来的另一个问题是共洗脱等因素导致的定量比值压缩效应(Nat Methods. 2011 Oct 2;8(11):937-40),也就是说,实际定量检测到的差异倍数会比真实差异倍数小。所以,对于标记定量蛋白质组分析得到的感兴趣关键蛋白,通常建议后续做进一步的PRM或MRM验证其定量准确性。

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