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pUC18 和 pUC19质粒图谱
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ,是zui常用的质粒载体,其结构组成紧凑,几乎不含多余的 DNA 片段,GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来,其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。
这两个质粒的结构几乎是*一样的,只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因,因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列,在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后,可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组 质粒。
特征序列区位:
&NBS p;
pBR322_origin | &NBS p; | 1471 - 852 |
Ampicillin | 2486 - 1626 | |
lac_promoter | 543 - 514 | |
AmpR_promoter | 2556 - 2528 | |
M13_pUC_rev_primer | 500 - 478 | |
M13_reverse_primer | 479 - 461 | |
M13_forward20_primer | 379 - 395 | |
M13_pUC_fwd_primer | 364 - 386 | |
lacZ_a | 398 - 250 | |
pGEX_3_primer | 51 - 29 | |
Orf2 | 2486 - 1626 |
NOS terminator sequence:
ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat
设计引物:
Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC及三个保护碱基)
Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC及三个保护碱基)
请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。如果没有,引物合成后,以任何一种pCAMBIA为模板都能扩增到该终止子序列。