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pUC18 和 pUC19质粒图谱 古朵新闻√
发布时间:2019-12-23   点击次数:350次

pUC18 和 pUC19质粒图谱

pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ,是zui常用的质粒载体,其结构组成紧凑,几乎不含多余的 DNA 片段,GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来,其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。

这两个质粒的结构几乎是完全一样的,只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因,因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列,在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后,可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组 质粒。

pUC18 和 pUC19质粒图谱

特征序列区位:

&NBS p;

pBR322_origin&NBS p;1471 - 852
Ampicillin 2486 - 1626
lac_promoter 543 - 514
AmpR_promoter 2556 - 2528
M13_pUC_rev_primer 500 - 478
M13_reverse_primer 479 - 461
M13_forward20_primer 379 - 395
M13_pUC_fwd_primer 364 - 386
lacZ_a 398 - 250
pGEX_3_primer 51 - 29
Orf2 2486 - 1626

NOS terminator sequence:

ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat

设计引物:

Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位点GGATCC及三个保护碱基)

Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位点GAATTC及三个保护碱基)

请查一下NOS终止子序列内有没有这两个酶切点。如果没有,引物合成后,以任何一种pCAMBIA为模板都能扩增到该终止子序列。

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