1. 确定您的样本类型和试剂盒可以兼容

　　常见样本类型有血清，血浆，细胞培养上清，如果是厂家实验验证过的，可根据产品说明购买使用。【注意：血浆制备用到的抗凝剂有 EDTA、柠檬酸盐、肝素等多种，相应的血浆性质存在差异，需单独确认兼容性】。

　　2. 试剂盒检测范围需要匹配样本中标志物浓度

　　ELISA试剂盒的定量检测范围需参考标准曲线，在标准曲线低和高浓度区间内属于线性范围，其中的值是可信和可定量的。浓度高于线性范围的样品要稀释到线性范围内来测量，而浓度低于线性范围的样品，其测量值不能用于计算浓度，只能用做参考。有一种常见的相关情况是：健康人样本中很多标志物的浓度偏低，测量值低于标准曲线低值。

　　3. 样本收集有讲究

　　以血清为例，样本收集可参考试剂盒说明书，但需注意以下要点。样本尽量用无菌管收集，避免细菌的酶类和代谢产品对结果的影响。采集过程要避免溶血，因为红细胞溶解释放的活性物质可能会影响检测。保存过程中如有沉淀，应离心后取上清液。样本若不立即测定，建议按照每次使用量分装保存在 -20℃，每次检测使用一管，即避免交叉污染和反复冻融，有能保证检测结果的平行可比性。

　　4. 实验前要准备好相应试剂

　　提前将所有试剂平衡到室温环境，这个过程大致需半小时左右。洗液是浓缩液，如有结晶析出，需*溶解后再进行稀释。A、B 两管显色底物在使用前15分钟按 1:1 配成混合液。为保证蛋白标准品溶液配制质量，蛋白标准品为冻干粉，ELISA试剂盒重溶前需将管子离心，加入说明书的缓冲液，慢速在摇床上摇匀或颠倒混匀，至少 15 分钟，不建议用枪头吹打。溶解后如需保存，按每次使用量分装后根据说明书要求的温度保存。梯度稀释蛋白标准品时，建议用聚丙烯管（对蛋白吸附力很低），每步都要充分混匀且更换新枪头，确保梯度准确性。

　　5. 仪器设备的准备也*

　　相关设备包括移液器、洗板机/摇床和酶标仪。移液器的准确性对于ELISA实验结果的可靠性十分关键，需要确保定期校准维护。摇床的使用是为了让反应体系快速达到平衡，获得稳定、可重复的结果。不用摇床对实验通常的影响是，OD 值低，CV 大。酶标仪等设备使用前提前 15 分钟开机预热。