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古朵生物:如何正确的选择Flag标签抗体?
发布时间:2020-05-15   点击次数:31次

    在免疫沉淀IP&免疫荧光IF如何正确的选择Flag标签抗体?

    Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由8个亲水氨基酸(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)组成的多肽片断。FLAG标签只有8个氨基酸组成,因此它不会占据其他表位与结合域,避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点,FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面,因此geng易与抗体结合以及被肠激酶酶解。

    由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端,这一系统已用于各种细胞类型,包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞nei定位,以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。比如在免疫荧光IF的实验里,同时配合EarthOx的Dylight 549荧光二抗,使用该抗体可以准确的定位出Flag融合表达蛋白在细胞内的位置。另外,做融合表达分析前,通过免疫共沉淀技术获得Flag融合表达蛋白也是非常重要的一步,因此选择一个合适的、可用于免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)Flag标签抗体也是很必要的。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody不仅能应用于细胞nei定位的IF实验,同样还能应用于IP实验。1:200甚至geng高的IP实验稀释比率,也说明了该抗体本身的具有很高的效价,同时,因为是单克隆抗体,因此特异性也很高。高效价所对应的高稀释比率也意味着超高性价比。

    除了上面所说的IP和IF实验,Flag标签抗体的基本应用还包括WB实验,EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody在该应用中同样表现优异。说明书的推荐起始稀释比例是1:1000,但在实验中,在1:10000的稀释比率下也表现优异(EarthOx也进行了50000次以后的稀释,仍然显示出很好的条带显示,没有在说明书里列出)。因此EarthOx的Flag标签抗体不但能通过WB实验很好的满足融合蛋白表达量的分析,并且在免疫荧光IF、免疫沉淀IP的试验中也有很好的表现,能满足Flag标签融合蛋白的细胞nei定位以及纯化的需要,而且其高效价和特异性,远远比其他Flag抗体具有geng高的性价比。

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