AMPPD发光显色试剂盒的AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物，在适宜的缓冲液中，随着酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者发出强度很高的光信号，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。
 

　　AMPPD发光显色试剂盒的操作步骤：
 

　　1、临用前，取适量的A1和A2，等量混合后获得Dioxetane Buffer。
 

　　2、按2.5mgAMPPD溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD底物溶液即为AMPPD Dioxetane Buffer(发色发光显迹液)，用于膜的染色。
 

　　3、取适量Dioxetane Buffer洗膜两次，每次15min。
 

　　4、对于PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应, 膜置于新鲜配制的AMPPD Dioxetane Buffer 作用5min。
 

　　5、将膜移入适量的AMPPD Dioxetane Buffer中，浸泡5min(AP反应)。
 

　　6、取出PVDF膜，滴干水分，将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上，向后折叠将膜包裹起来，成为不漏水的封闭体。
 

　　7、在暗房中，将膜正面朝下放在感光胶片上，曝光数秒至数小时。
 

　　8、如需要，在室温下以适量的TBS洗膜15min。
 

　　9、将膜放入AMPPD Dioxetane Buffer，条带应在10～30min内出现。
 

　　10、用蒸馏水洗膜，终止反应。晾干后拍照留*的记录。
 

　　AMPPD发光显色试剂盒的使用注意事项：
 

　　1、PVDF膜置于胶片上后，不要改变位置。
 

　　2、曝光时间应根据实验情况，自行摸索。
 

　　3、配制好的AMPPD Dioxetane Buffer，应避光低温保存。
 

　　4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。