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提取的基因组DNA有降解咋办?
更新时间:2021-07-27 点击次数:858次
DNA降解的因素:
外界物理因素:温度、湿度
化学因素:pH值、水解反应、氧化反应
生物因素:酶解及微生物侵染等作用。
这些因素都直接与DNA的构型、分子组成有关
DNA分子结构:
DNA是由许多脱氧核苷酸残基按一定顺序彼此用3’,5’-磷酸二酯键相连构成的长链。
[形成链的作用力——磷酸二脂键,易被水解];
大多数DNA含有两条这样的长链
[两条链间以氢键相连接——氢键在强电解质环境,尤其在高酸度环境内易开键]
也有的DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。有的DNA为环形,有的DNA为线形。
选取的材料不新鲜或反复冻融,采集材料后未及时处理或未低温保存:陈旧血液或不新鲜的材料中,细胞凋亡导致DNA降解,或者低温保存的样品经反复冻融导致细胞破碎,内源性核酸酶降解DNA,因此应该选用新鲜的材料样品,不能及时处理则低温保存,运输过程中应该使用干冰:
1 ) 未能有效的抑制内源性核酸酶的作用:
某些DNase含量丰富的动植物组织样品应在液氮中研磨或匀浆,研磨过称中随时补充液氮,并在样品未*解冻之前加入含有抑制核酸酶作用的裂解液。
2 ) 操作过于剧烈导致 DNA 被机械打断:
预处理的样品应该加入细胞裂解以后,所有操作应该尽量柔和,避免剧烈振荡。
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