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使用发光显色试剂盒前怎么可能不了解这些!
更新时间:2022-04-25   点击次数:188次
  发光显色试剂盒是一种超敏ECL化学发光试剂盒,本产品与二抗上偶联的辣根过氧化物酶(HRP)发生化学反应发出萤光,从而可以通过用X光片压片或其它适当化学发光成像设备检测样品。
 
  HRP(40 kDa)已成为化学发光蛋白质印迹检测的常规酶。其稳定性和较小的分子量使其应用逐渐普及,通过使每个IgG标记更多的分子,可实现更高的检测灵敏度。此外,HRP化学发光底物的改良和发展使其相较AP底物具有更高的蛋白质印迹检测灵敏度。
 
  用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物多为双组分系统,由稳定的过氧化物溶液和增强型鲁米诺溶液组成。
 
  如果要制备工作液,需要将两种组分混合在一起。当与结合有HRP标记抗体(或其他探针)的印迹一起孵育时,化学反应生成的发射光可在425nm下,通过X光胶片、CCD成像系统和用于检测化学发光的磷光成像仪进行采集。发射光仅在酶-底物反应期间发生;
 
  因此,一旦酶周围的底物耗尽,信号输出将停止。虽然X-光胶片能够提供定性和半定量的数据,并可以用来确认靶蛋白的存在,但冷CCD成像装置能够提供定性分析、即时图像处理,具有更高灵敏度、更高分辨率和比胶片更大的动态范围等优点。
 
  化学发光显色试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。本试剂盒优化了底物组成,使用了新型高效增强剂,发光强度比传统 ECL 显色液提高了 50-100 倍,并有效地降低了背景。
 
  试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水,提高了试剂盒的稳定性。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。
 
  然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时,显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。

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