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一次性血液增菌培养基的成分及制备方法
更新时间:2022-08-23   点击次数:199次
  一次性血液增菌培养基用于血液、胸、腹水等无菌液体标本需氧菌的增菌实验时使用,满足各种需氧菌的培养需求。该培养基营养成分丰富,加入指示剂,在无菌的情况下显红色,有菌生长的情况下为黄色,如有产硷细菌生长显深红色。
 
  一、一次性血液增菌培养基的成分:
 
  蛋白胨、牛肉膏(粉)、氯化钠、葡萄糖、酵母粉、柠檬酸钠、磷酸氢二钾、5 g/L对氨基苯甲酸溶液、1 mol/L硫酸镁溶液、4.0 g/L酚红溶液、青霉素酶、聚茴香脑磺酸钠(SPS)、蒸馏水
 
  二、一次性血液增菌培养基的制法:
 
  除酚红、青霉素酶外,其余成分混合加热溶解,校正pH7.4,再加酚红,分装到带有翻口橡皮塞的玻璃瓶中,每瓶30~50mL,在橡皮塞上插一注射针头通气,经121℃15 min高压灭菌后,趁热拔去针头,37℃培养24h进行无菌试验,合格者用铝盖压封,临用时每瓶加入青霉素酶1.5~2.5 IU。
 
  用于动物性食品中四种致病菌多重PCR快速检测方法研究:
 
  目前对食品中致病菌检测的方法以微生物常规培养法为主,需要37天,操作繁琐,所用试剂复杂多样,费用很高,不能满足实际商品流通需要。PCR(聚合酶链式反应)技术具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速的特点,使用PCR技术检测食品中致病菌的研究方兴未艾。大肠埃希氏菌O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌和荧光假单胞菌是污染动物性食品的四种重要的致病菌。
 
  结合通用前增菌技术研究,建立了一种多重PCR检测新方法,可以在LB培养基通用增菌后的6h内一步同时检测食品中污染的这四种致病菌。该方法具有特异性良好、简便快速、经济实用的优点。研究结果如下:(1)对大肠埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌、伤寒沙门氏菌、宋氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、创伤弧菌、单增李氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、荧光假单胞菌等九种食源性致病菌进行通用前增菌方法研究,实验表明,在LB肉汤培养基36℃培养18 h,增菌效果较好,且增菌数量级均衡一致,达108 cfu/mL。
 
  (2)LB、NB和UPB培养基中30℃、33℃、36℃培养12h,大肠埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌、伤寒沙门氏菌、宋氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、创伤弧菌、单增李氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、荧光假单胞菌等九种菌增菌数量级达到106以上,也能够满足PCR等检测方法的需要。但这几种培养基在36℃的培养时间应选在1218 h左右,不宜超过18 h。

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