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结合特点及作用了解聚合酶
更新时间:2022-10-26   点击次数:491次
  聚合酶是细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶,以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。下面是介绍一下聚合酶的特点及其作用。
 
  聚合酶的特点:
 
  [1]以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为前体催化合成DNA;
 
  [2]需要模板和引物的存在;
 
  [3]不能起始合成新的DNA链;
 
  [4]催化dNTP加到生长中的DNA链的3'-OH末端;
 
  [5]催化DNA合成的方向是5'-+3'。
 
  聚合酶的作用:
 
  [1]聚合作用:在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApol I逐个将核苷酸加上去,就是DNApol I的聚合作用。酶的专-性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸_二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之。
 
  [2]3'→5'外切酶活性一校对作用:这种酶活性的主要功能是从3'-→5'方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时,由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象,从而被3'-+5"外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用,这表明温度升高使DNA生长链3'末端与模板发生分离的机会更多,因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP,且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制,并继续进行DNA的合成。由此推论,3'→5'外切酶活性的主要功能是校对作用,当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3'→5'外切酶切除,以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低,而易发生突变,从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性很低。相反,另外-些具有抗突变能力的T4突变株中的T4DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性比野生型高得多,因此,其DNA复制真实性好,变异率低。可见,3'→5'外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。
 
  [3]5'→3'外切酶活性一切除修复作用:5'-+3'外切酶活性就是从5'-+3'方向水解DNA生长链前方的DNA链,理产生5'-脱氧核苷酸。这种酶活性只对DNA上配对部分(双链)磷酸_二酯键有切割活力作用,向是5'→3'。每次能切除10个核苷酸,而且DNA的聚合作用能刺激5'-→3'外切酶活力达10倍以上。因此,这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。对冈崎片段5'末端RNA弓|物的去除依赖此种外切酶活性。

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