甲醇酵母表达常用溶液及缓冲液的配制

　　1.毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制

　　1.1 各种母液的配制

　　10*YNB：(含有硫酸铵、无氨基酸的13.4%酵母基础氮源培养基) 4℃保存。34g酵母基础氮源培养基(无硫酸铵)+100g硫酸铵，溶于1000ml水中，过滤除菌。

　　500*B：(0.02%生物su Biotin) 4℃保存 保存期为1年。20mg的生物su溶于100ml水中，过滤除菌。

　　100*H：(0.4%Histidine 组氨suan) 4℃保存 保存期为1年。400mg的L-组氨suan溶于100ml水中，(加热至50℃以促进溶解)，过滤除菌。

　　10*D：(20%Dextrose 葡萄糖)保存期为1年。200g葡萄糖溶于1000ml水中，灭菌15min或过滤除菌。

　　10*M：(5%Methanol 甲醇) 保存期为2个月。将5ml的甲醇与95ml水混匀，过滤除菌。

　　10*GY：(10%Glycerol 甘油) 保存期为1年以上。将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。

　　100*AA：(0.5% of each Amino Acid，各种氨基酸) 4℃保存 保存期为1年。分别将500mg的L-谷氨suan、L-蛋氨酸、L-赖氨酸、L-亮氨suan和L-异亮氨suan溶于100ml水中，过滤除菌。

　　1M 磷酸钾溶液(potassium phosphate buffer，pH6.0)，将1mol/L的K2HPO4溶液132ml与1mol/L的KH2PO4溶液868ml混匀，其pH为6.0，如需调节pH，则使用磷酸和氢氧化钾调节pH。

　　1.2 常用溶液及缓冲夜

　　1.2.1 碱裂解法抽提质粒DNA所用溶液：

　　溶液Ⅰ：50mmol / L glucose，100mmol / L EDTA，25mmol / L Tris-HCI (pH 8.0)

　　溶液Ⅱ：0.2mol/L NaOH，1% SDS(临用时配制)

　　溶液Ⅲ：29.44g KAc，11.5ml Acetic acid，加ddH2O至100 ml。

　　4℃保存。

　　1.2.2 10% 甘油 (Glycerol)：

　　将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。保存期为1年以上。

　　1.2.3 Rnase-H2O：

　　1ul Rnase 加入1ml 灭菌 dd H2O。4℃保存。

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