【古朵生物】ELISA试剂盒的运用过程及操作方法

　　ELISA试剂盒操作较繁杂,在操作中应留神以下5个方面。

　　1. 跟着病况的进展或由其他因素影响，某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。间接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反响。

　　2. 加样一般运用加液器，在ELISA试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加间断液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶结合物、底物和间断液时则不需更换吸嘴。

　　3.在成批手艺检测中，还应留神操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原抗体反响和酶促反响时间不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不留神可能会导致过错效果或定量不准。

　　4. 洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的免疫反响物，间断抗原抗体反响，除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。

　　5. 断定效果须运用ELISA试剂盒测读仪，比色法判读可选择单波长或双波长，根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片，以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。酶标仪具有杰出的重复性。

　　ELISA试剂盒用于检测的样品应保持新鲜.

　　2.用户在初度运用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底.

　　3.每次试验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4.丈量时先用此孔调OD值至零.

　　4.要确保微量加样器的精确性,能够运用蒸馏水和电子天平进行确定(因为蒸馏水不含杂质,温度环境为20%左右时,lmL的水能够看作是lg 200 L的水能够看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程进行确定.

　　5.因为底物显色剂对光及其灵敏,因此要避光保存.

　　6.手艺洗板时每次参加洗涤液后.应静置15～30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染.甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干.

　　7.检测吸光度前应将酶标仪翻开,将其预热30min以上.

　　8.ELISA试剂盒底物为TMB,防止与皮肤相触摸.终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量防止触摸皮肤.

　　9.孵育的时间应该严格依照试剂盒说明书上的时间为准.

　　10.对样本的结果有疑问时需要运用其他检测方法进行验证.

　　11.没有去离子水或双蒸水时,能够运用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿运用自来水.

　　12.在运用微量加样器时,汲取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使汲取标准品溶液.

　　13.汲取液体时速度不易太快,以免发生气泡,汲取的量不够精确.

　　14.将液体加到酶标孔中时,防止枪头和孔内液体触摸,可使枪头上的液滴和孑L壁触摸,液滴会自然流下去.吸入液体时的方法是吸两档打一档,防止因为枪头的毛细作用使得部分液体不能流出而造成的误差.

　　15.ELISA试剂盒汲取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差.

　　16.试验前30min将试剂盒中的一切试剂从冰箱取出,使试剂盒中的一切试剂与提取好的样品溶液的温度相同,酶标板只需取出所需量.

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