【古朵生物】ELISA试剂盒方法总结及实验小妙招

　　(一)间接法

　　1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜;

　　2.次日洗涤3次;

　　3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;

　　4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;

　　5.37℃孵育35-60分钟，洗涤;

　　6.’*后一遍用DDW洗涤。

　　其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。

　　(二)双抗体夹心法

　　1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

　　5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

　　ELISA试剂盒实验小妙招

　　常有刚刚接触ELISA实验的新手说操作复杂，步骤化很多，不易实验。其实当我们掌握了其中的技巧与注意避免之后就会简单很多。我公司高手分析出操作要点提示，这些个实验技巧得记牢：

　　1. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

　　2. 所有液体组分使用前充分摇匀。

　　3. 实验前，产品应保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

　　实验记录

　　1.所有实验的原始资料均应存档;

　　2.所有的记录均应规范登记在册;

　　3.原始登记表应记录试剂来源、批号;

　　4.质控血清的来源及测定值并注明是否在控;

　　5.签上实验者姓名及审核者姓名。

　　评价的方法

　　1.发质控物进行调查，这是目前国内外常见的形式，采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将结果报至组织者(部、省临检中心)。组织者通过统计分析，再将评价结果寄回实验室，使其了解工作质量，发现问题，提高质量。其缺点为由于各实验室吃小灶或互相打电话修改结果而达不到真正评价作用。

　　2.现场调查，事先不通知，临时派出人员到各实验室，规定采用常规方法，检测一组标本，进行评价。这种方法可以解决实际问题，进行现场指导，组织者常因人力、物力的原因而不能经常性进行。

　　ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。