18321664727
返回首页 在线留言 联系我们
首页 > 技术支持 > 粒体柠檬酸( MCA)含量试剂盒说明资料

技术支持

粒体柠檬酸( MCA)含量试剂盒说明资料
更新时间:2023-03-06   点击次数:244次

 

  粒体柠檬酸( MCA)含量试剂盒说明资料

 

  线粒体柠檬酸(Mitochondrion Citric Acid, MCA)含量 试剂盒

  英文名称:Mitochondrial citric acid(MCA) Content Assay Kit

  别名:线粒体柠檬酸含量测定试剂盒 MCA Kit 线粒体柠檬酸(MCA)含量测定试剂盒 线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒

  检测方法:常量法

  规格:

  25管/24样

  25管/48样

  产品详细介绍

  测定意义:

  CA是线粒体三羧酸循环的个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。

  配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况,(3)乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

  测定原理:

  CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。

  产品说明书

  规格:25 管/24 样

  线粒体柠檬酸(Mitochondrion citric acid, MCA)含量试剂盒说明书

  分光光度法

  正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

  测定意义:

  CA 是线粒体三羧酸循环的个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成, 其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量, 其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮 酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β -氧化途径提供的乙酰 CoA 情况,(3)乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。

  测定原理:

  CA 在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α -酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α -酮酸进一 步与苯肼反应,生成相应的α -酮酸苯腙;α -酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰,该波长下吸光度 的变化程度可反映出 CA 的含量。

  自备实验用品及仪器:

  分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。

  试剂组成和配制:

  酸性提取液:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

  碱性提取液:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

  试剂一:液体 7.5mL×1 瓶,4℃保存。

  试剂二:液体 2.5mL×1 瓶,4℃保存。

  试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 7.5mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃ 保存;

  标准品:液体 1mL×1 支,10μ mol/mL 柠檬酸标准液,4℃保存。

  线粒体中柠檬酸提取:

  称 0.05~0.1g 样品(建议称 0.1g 样本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃离心 5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min 4℃离心 10min,弃上清(取 300μ L 该上 清液和 300μ L 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),取此溶液 300μ L 和 300μ L 碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋白质含量 测定)。

  测定步骤:

  1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 330nm,蒸馏水调零。

  2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。

  3、样本测定:

  空白管和标准管通常只需要各做一个。

  试剂名称(μ L)空白管标准管测定管

  试剂一300300300

  蒸馏水300

  标准液 300

  样本 300

  试剂二100100100

  试剂三300300300

  充分混匀,330nm 立即测定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2,Δ A=A2 –A1。

  柠檬酸含量计算:

  (1)按蛋白浓度计算

  柠檬酸含量(μ mol/mg prot)=[C 标准管×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白 管) ×V 样]÷(V 样÷Cpr)=10×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白管)÷Cpr 蛋白质含量需要另外测定。

  (2)按样本鲜重计算

  柠檬酸含量(μ mol/g 鲜重)=[C 标准管×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白 管) ×V 样]÷(W×V 样÷V 样总)=10×(Δ A 测定管-Δ A 空白管)÷(Δ A 标准管-Δ A 空白 管)÷W

  C 标准管:标准液浓度,10μ mol/mL; V 样:加入反应体系中样本体积:0.3mL;V 样总:加 入提取液体积:1mL;Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

  注意事项:

  低检测限为10nmol/mg prot或1μ mol/g鲜重。

  粒体柠檬酸( MCA)含量试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。

 

分享到:

返回列表 | 返回顶部
上一篇 : 丙酮酸(Pyruvic Acid PA)含量测定试剂盒说明    下一篇 :  古朵新闻| 什么是TEV蛋白酶
网站首页 公司简介 产品中心 招聘中心 技术支持 企业动态 联系我们 管理登陆
上海古朵生物科技有限公司版权所有 主营:优质胎牛血清,EA36染色液配制,迪夫快速染色液
GoogleSitemap ICP备案号:沪ICP备19048203号-2 技术支持:智慧城市网
在线客服