大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒如何操作更精确

　　大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒

　　检测原理

　　试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠雌二醇(E2)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠雌二醇(E2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

　　样品收集、处理及保存方法

　　1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

　　3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

　　5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　自备物品

　　1. 酶标仪(450nm)

　　2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3. 37℃恒温箱

　　操作注意事项

　　1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。

　　2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封(低温干燥)保存。

　　3. 预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。

　　4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

　　5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

　　试剂盒组成

　　名称96孔配置48孔配置备注

　　微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无

　　标准品0.3mL0.3mL无

　　样本6mL3mL无

　　检测抗体-HRP10mL5mL无

　　20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

　　底物A6mL3mL无

　　底物B6mL3mL无

　　终止液6mL3mL无

　　封板膜2张2张无

　　说明书1份1份无

　　自封袋1个1个无

　　注：标准品浓度依次为：64、32、16、8、4、0 pmol/L.

　　试剂的准备

　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

　　洗板方法

　　1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

　　2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

　　操作步骤

　　1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

　　3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL;

　　4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　结果判断

　　绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

　　大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒 试剂盒性能

　　1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

　　2. 灵敏度：检测浓度小于0.1 pmol/L。

　　3. 检测范围：2 pmol/L - 64 pmol/L

　　4. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

　　5. 重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。

　　6. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

　　7. 有效期：6个月

　　免责声明

　　1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于研究实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

　　2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

　　大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。