DEAE-琼脂糖凝胶 CL-6B使用说明书

　　中文名：DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B

　　英文名：DEAE Sepharose CL-6B

　　规格：100ml、500ml

　　粒径： 45-165μm

　　配基基团：carboxymethyl(羧甲基)

　　总离子交换量：0.09-0.13mmol/g凝胶

　　工作PH值：6-10

　　操作温度：4-40℃

　　性状(以下信息仅供参考)：含20%乙醇，底部为乳白色胶体。

　　保存：2～8℃

　　用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)适用于各种带阳性电荷生物大分子的浓缩纯化等。

　　DEAE-琼脂糖凝胶 CL-6B

　　DEAE-琼脂糖凝胶 CL-6B适用范围

　　本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

　　DEAE-琼脂糖凝胶 CL-6B使用方法

　　1、装柱：

　　a、让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

　　b、根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。

　　c、将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

　　d、用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

　　e、打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

　　2、平衡：

　　让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris 、PBS等。

　　3、上样：

　　a、样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。

　　b、一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

　　c、介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用DEAE介质时，推荐的pH值是大于目标产品等电点1个单位。

　　4、洗脱：

　　DEAE介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。

　　5、再生

　　一般用高盐浓度的缓冲液(含1~2mol/L NaCl)洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

　　6、在位清洗

　　a、对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

　　b、对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

　　c、对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡;清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

　　7、注意：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入;在使用过程中，不能使用强酸，如使用酸洗，应使用浓度低于0.1 M的冰醋酸。

　　8、去热源：用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

　　a、2倍柱体积的70%乙醇;

　　b、2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5;

　　c、1倍柱体积4M尿素;

　　d、3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl;

　　e、以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

　　9、消毒用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

　　10、灭菌置介质于高压灭菌锅中120℃下30分钟。

　　DEAE-琼脂糖凝胶 CL-6B注意事项

　　1、产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20%乙醇)，通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃(20%乙醇)。

　　2、本产品避免与氧化剂接触;避免在pH值<4时长时间暴露(一周，20℃)。

　　3、保质期：5年。

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