ELISA常见组织样本制备方法及处理指南

　　为了保证ELISA实验数据的可靠性，在收集标本前都必须有一个完整的计划。我们提倡新鲜样品应尽早检测，对收集后一周内检测的样本，及时储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期性收集样本，在取材后讲标本及时分装后放在-20℃或-80℃条件下保存。因冰箱与室温有一定温差，蛋白容易降解，直接影响实验质量，故应避免反复冻融。不同的样本请根据实际情况处理。

　　样品制备方法

　　1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

　　3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

　　4.细胞培养上清：检测分泌性的成分时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成分时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

　　7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　注:

　　样本需清澈透明，如有沉淀物，请离心除去后再测

　　请勿使用溶血、高血脂或污染的样本

　　冻结血清融解后可上下颠倒充分混匀宣轻缓, 不要强烈震荡

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