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磷酸化热休克蛋白27抗体测定步骤:
1.抗原包板:15ug/ml 小鼠IgG-pH9.6·CB液 0.1ml/孔;
2.37°C包被60min或4°C过;
3.PBST洗板3次,5min/次;
4.加入倍比稀释的HRP标记抗体 0.1ml/孔;
5.37°C 30min;
6.PBST洗板5min/次×3;
7.底物液0.1ml/孔 37°C 5-10min;
8.终止液:2N H2SO4 0.05ml/孔;
9.450nm 测定OD值;
10.阳性OD值比对照值大3倍,为判断效价稀释度。
磷酸化热休克蛋白27抗体修复方法:
1,沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温。
2,微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
磷酸化热休克蛋白27抗体鉴定方式:
1、抗体的效价鉴定:不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管 凝集反应,琼脂扩散试验,酶联免疫吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散 试验来鉴定。
2、抗体的特异性鉴定:抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以 交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在ic50时的浓度,并按 公式计算交叉反应率。
如果所用抗原浓度ic50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的ic50浓度几乎是无穷大时,表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为0,即该血清的特异性较好。
3、亲和力:是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗 体复合物稳定的分子间力有氢键,疏水键,侧链相反电荷基因的库仑力,范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数k表示,k的单位是l/mol。抗体亲和力的 测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义。
磷酸化热休克蛋白27抗体上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。