古朵技术分享：琼脂糖凝胶电泳制备方法及核酸检测

　　一. 实验目的

　　1、掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;

　　2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。

　　二. 实验原理

　　琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。

　　DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。

　　溴化乙锭(EB)未扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA含量成正比。

　　三、仪器和试剂

　　仪器： 微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉

　　试剂： 琼脂糖：1.0%;电泳缓冲液(50 × TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g ，冰醋酸5.7ml ， 0.25mol/L EDTA (pH8.0)20ml ，加蒸馏水至100ml ) EB：5 ?l / 100 ml TBE

　　电泳材料：标准分子量核酸(DL2000)

　　四. 操作步骤

　　(1)制胶(以20 mL为例)

　　a. 称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液(pH 8.0)，摇匀;

　　b. 微波炉加热，至琼脂糖wan全溶解(要防止过热溢出三角瓶);

　　c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖(约50℃)加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～6 mm(如有气泡要把气泡赶出)，在室温下冷却凝固(约30~ 45 min);

　　d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。

　　(2)点样

　　用微量移液器将5 ?l含蓝色染液的 DL2000 加入点样孔下部。

　　(3)电泳

　　打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。

　　(4)观察

　　将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，根据条带粗细，可粗略估计该样品DNA的浓度。如同时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估计样品的分子量。

　　五、实验结果

　　点样时效果较好的照片点出的白色荧光线比较亮，条带粗细均匀;条带没有出现两端粗中间细的情况

　　琼脂糖凝胶上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。