古朵课堂——Elisa试剂盒双位点一步法原理、应用及注意事项

　　双位点一步法的原理

　　Elisa试剂盒双位点一步法应用识别抗原不同位点2个单克隆抗体(McAb)作双抗体夹心法测定。包被一个McAb后，同时加入待检抗原和另一个McAb酶标物，待检抗原上的2个抗原决定簇同时与固相McAb和酶标McAb结合，形成固相McAb-待检抗原-酶标McAb复合物，加底物通过显色反应进行测定。

　　双位点一步法的操作步骤

　　1、将1个McAb与固相载体连接，形成固相McAb。洗涤除去未结合物。

　　2、同时加入待检标本和酶标McAb，温育，是待检抗原和固相McAb及酶标McAb反应形成双抗体夹心复合物。洗涤除去未结合物。

　　3、加底物显色。

　　双位点一步法的应用

　　适用于双抗体夹心法的Elisa试剂盒，有些也可用双位点一步法检测。如HBsAg同样可用此法进行检测，其原理为：将纯化的抗HBs吸附于固相载体表面，加入待检血清(或血浆)，同时加入辣根过氧化物酶标记的另一个抗HBs(酶结合物)，如血清或血浆中含有HBsAg，则通过温育形成固相McAb-HBsAg-酶标McAb复合物，加入底物，通过显色反应进行测定。若血清或血浆中不含HBsAg，通过洗涤除去未结合物，加底物后就不显色。

　　双位点一步法的评价

　　由于应用McAb，双位点一步法具有很高特异性，一步法省时、简便。

　　当待检抗原浓度过高时，大量过剩抗原分别饱和固相McAb和酶标McAb而抑制夹心复合物的形成，这种现象称为钩状效应(hook effect)，可出现假阴性结果。可将待检标本稀释后再做或提高抗体试剂的亲和力、浓度、纯度定以消除钩状效应。

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