大鼠白细胞介素1β[IL-1β]酶联免疫分析试剂盒步骤分析

　　大鼠白细胞介素1β试剂盒实验前处理步骤

　　1、试验前将试剂和待测样品放置室温下平衡[20-25℃]充分混匀。并确定好本次检测所需的酶标板孔数目，将所需要的微孔放置到配套板架上。

　　2、按照要求用蒸馏水或纯净水来稀释浓缩清洗液，充分混匀后备用。

　　3、将本次实验所需微孔做好相应标记，[如有需要做空白对照孔可预留一孔作为空白对照孔备用]，采用双孔平行加样。

　　大鼠白细胞介素1β[IL-1β]酶联免疫分析试剂盒加样以及温育步骤

　　1、在微孔中将标准品按每孔各[100μl]依次加入一排孔中，并做好相应标记。

　　2、将处理后的待测样品按每孔各[100μl]依次加入，并做好相应标记。注标准品及样品不要重复加入同一微孔中。

　　3、如预留了空白对照孔则除去空白对照孔之外在标准品孔及待测样品孔中分别加入[50μl]酶标记物，充分混匀。

　　注：加样时尽量将液体加到微孔底部不要触及孔壁，产生大量的气泡。这样会导致吸光度值的偏差。使用双孔试验将会大大减少这一现象的发生。建议每次检测均应绘制标准曲线图。

　　4、将包被微孔板覆膜或加盖放置在37℃孵育反应60分钟后充分弃尽孔内液体并扣干孔内剩余残液，用预先稀释好的清洗液反复冲洗5次[zui后一次冲洗后可使用干净的吸水纸包裹微孔板倒置于桌面拍打以充分弃尽孔内剩余残液。每次冲洗的间隔时间为3-5秒即可]。

　　注：洗涤过程非常重要，在冲洗微孔板过程中，务必反复清洗干净，并扣干微孔中的残余液体，不要使孔内液体溢出污染其他实验孔，否则将导致降低度，造成吸光度偏高的假象并有可能使实验zui终失败。

　　5、如预留了空白对照孔则应包括空白对照孔在内，每孔依照次序先加入底物Ⅰ一滴[约50μl]。再加入底物Ⅱ一滴[约50μl]充分混匀。在室温下避光反应15分钟。6

　　反应过后每孔分别加入终止液[50μl]，充分混匀，终止反应。

　　注：加底物Ⅰ/Ⅱ及终止液的过程一定要按照先后顺序进行，不得颠倒，也不可先将2种底物混合后再加入微孔中，否则将会导致试验失败。

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