小鼠白介素9(IL-9)酶联分析检测ELISA试剂盒使用说明

　　Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置

　　标准品稀释液：1.5ml×1瓶

　　酶标试剂：3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)

　　本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆

　　使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本白介素9(IL-9)含量。

　　试验原理：

　　IL-9试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-9浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-9和标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-9的浓度呈比例关系。

　　试剂盒内容及其配制

　　试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制

　　96/48小鼠份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型

　　塑料膜板盖1块半块即用型

　　标准品：80ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀

　　空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型

　　标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型

　　标记的抗IL-9抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型

　　洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释

　　底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

　　标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型

　　自备材料

　　1. 蒸馏水。

　　2. 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

　　3. 振荡器及磁力搅拌器等。

　　安全性

　　1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

　　2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

　　3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

　　操作注意事项

　　1. 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

　　2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

　　3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

　　4. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

　　5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

　　6. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

　　7. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

　　8. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

　　9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

　　样品收集、处理及保存方法

　　1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

　　3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

　　5、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　局限

　　6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

　　白介素9(IL-9)ELISA试剂盒性能

　　1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

　　2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

　　3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

　　结果判断与分析

　　1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

　　2、以吸光度OD值为纵坐标(Y)，相应的IL-9标准品浓度为横坐标(X)，做得相应的曲线，样品的IL-9含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

　　3、检测值范围：0-80ng/ml

　　4、敏感度： 0.1 ng/ml

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