ELISA实验加样防错常见问题及小经验

　　实验常见问题解答：

　　问：做直接Elisa法检验小鼠血清中的IgE抗体，设空白对照、和阴性对照、阳性血清稀释倍数为5千、1万、10万、20万不等，用的是生物s符号的羊抗鼠IgE抗体，和亲和素的辣根过氧化物酶。可是效果除了空白对照孔没有颜色外，其他各孔全有颜色，而且OD值都相差不大，为什么?

　　答复：或许原因如下：

　　(1) 水质被金属离子等污染;防止办法尽量运用新鲜水或蒸馏水。

　　(2) 洗刷不充分，样品中其它成分残留或酶残留;防止办法洗刷液应注满微孔，充分洗刷。

　　(3) 移液头重复运用，未洗净或消毒不; 防止办法移液一次性运用。

　　(4) 酶标板灵敏度过高。

　　(5) 一抗显色时间的操控等等，关于ELISA的每一步都要留心才行。

　　96T 检测84个样本，12孔用于制造标准曲线

　　48T 检测42个样本，6孔用于制造标准曲线

　　(1)用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常简略差异。

　　(2)可以使用液面反光与没有加的孔加以差异

　　(3)在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面发作小气泡，也可以加以差异

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