【古朵生物】影响ELISA试剂盒样本的因素有哪些？

　　1、样本的保存：在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、会造成假阳性;为避免上述问题，在ELISA试剂盒测定血清标本时最好能新鲜采集;如果不能立即测定，根据相应的时间保存相应的温度，5d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应-20℃低温冻存;如冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。

　　2、样本的时间：因为塑料试管能吸附抗原物质，所以样本长时间放在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。一般方法是使用真空采血管;并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

　　3、样本受细菌污染：因菌体中可能会含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，可能会产生非特异性显色而干扰测定结果。

　　4、样本的凝固：样本凝固不全。在实验中，有的时候心急为了争取时间快速检测，ELISA试剂盒在血液还未开始凝固的时候就强行离心分离血清，导致血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果;因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

　　5、样本溶血：溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)，ELISA试剂盒在洗涤过程中往往难以洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性。所以严重溶血标本禁用。

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