酶联免疫试剂盒工作原理及实验操作步骤

　　酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量人促卵泡素(FSH)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

　　酶联免疫试剂盒工作原理:

　　促卵泡素(FSH)是动物脑垂体分泌作用于卵巢卵泡生长、发育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透过细胞膜,FSH必须与靶细胞膜上的促卵泡素受体(FSHR)结合,经过受体介导将信息传递到靶细胞内,才能发挥其生物学功能.所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物s(biotin)标记。样品和生物s标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

　　酶联免疫试剂盒工作环境:

　　1. 37℃恒温箱。

　　2. 标准规格酶标仪。

　　3. 自动洗板机。

　　4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

　　5. 蒸馏水，容量瓶等

　　6. 干净的试管和Eppendof管

　　酶联免疫试剂盒操作步骤:

　　1. 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

　　2. 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。

　　3. 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。

　　4. 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

　　5. 将准备好的生物s抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

　　6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。

　　7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

　　8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。

　　9. 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有 明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应zui长不要超过30分钟)。

　　10. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。

　　11. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

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