ELISA实验丨试剂盒标准曲线不佳

　　ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，古朵生物技术总结如下原因：

　　一、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围

　　ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：

　　序号可能原因解决方法

　　1、如OD绝对值靠谱，则显色过度TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断， 当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。

　　2、仅作单波长检测由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等， 对结果也有影响。建议最终结果以双波长为最准确。

　　二、标准曲线最高点吸光值偏低

　　ELISA标准曲线最高点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：

　　序号可能原因解决方法

　　1、粉末标准品未充分溶解粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀， 室温静置30分钟，充分溶解。

　　2、标准品反复冻融标准品反复冻融后活性降低。

　　3、孵育温度、时间按说明书要求孵育条件进行孵育。

　　4、显色时间控制TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。

　　三、标准曲线无梯度

　　ELISA 实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：

　　序号可能原因解决方法

　　1、样品或标准品污染避免污染

　　2、错误的样品或标准品的稀释按照说明书稀释

　　3、偶联抗体浓度过高按照说明书调整到最佳的浓度

　　4、TMB底物孵育时间过长调整到合适的孵育时间

　　5、错误的孵育时间或温度按照说明书

　　6、孵育时未加盖导致溶液挥发和污染贴封片或加盖

　　总结:

　　得到的ELISA标准曲线，需要注意几点：

　　1、 充分溶解标准品;

　　2、 标准品避免反复冻融;

　　3、 梯度稀释标准品注意混匀。

　　ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。