姬姆萨染色法的操作步骤及注意事项

　　姬姆萨染色法简称姬氏染色，是用天青色素、伊红、次甲蓝混合而成的姬姆萨染料对血液涂抹标本、血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等标本进行染色的染色方法。染前用蛋白酶等进行处理，然后再用姬姆萨染液染色，在染色体上，可以出现不同浓淡的横纹样着色。姬姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。

　　作用机理：

　　姬姆萨染色液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质，细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质，中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

　　PH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境里下在电荷增多，易和伊红结合，染色为偏红，在偏三性环境里负电荷增多，易和美蓝或天青结合，染色偏蓝。所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。配制顼特液一定用优质甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。一般性操作技术血涂片制备、细胞染色、显微检查、血液病诊断、染色不良。

　　操作步骤：

　　1、滴加姬姆染色液A液(0.5-0.8ml)于涂片上，并让染液覆盖整个标本涂色片染色1分钟。

　　2、将姬姆萨染色液B液滴加于A液上面(滴加之量为A液的2-3倍)以洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10分钟。

　　3、水洗(冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上)。

　　4、干燥，镜检。

　　注意事项：

　　1、染色时间要视何种标本，涂片薄厚，有核细胞多少，何种细胞及温室等而定;通常染血液涂片时滴加B液后染1-3分钟即可，染骨髓片则应不少于5分钟。

　　2、做骨髓涂片时因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。

　　骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞质空泡形成，出现草酸盐结晶。

　　3、染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染液沉着于涂片上。

　　4、做血细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37T温箱中保湿促干，以免细胞变形缩小。

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