古朵生物研究牛血清是细胞培养的实验原理

　　牛血清是细胞培养基中的中药成份之一。在培养基中加入适量血清(10%)，首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性;再次，它还能中止胰m的作用，并保护细胞免受机械损伤等。但是血清成分复杂，不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长作用的差异较大。血清的保存期只有一年，不同存放时期的血清的效力也不同。所以，当新购得的血清或要在开始一个重大试验的时候，应首先进行牛血清的筛选。 筛选时，通常选用正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞，也可以使正要准备培养的细胞。另外，用已知血清作对照。

　　仪器、材料和试剂

　　仪器

　　CO2 培养箱，超净工作台，微量加样器，灭菌锅

　　材料

　　96孔培养板，刻度吸管，移液管，试管，吸管，废液缸，血球计数板，HeLa细胞，Mel细胞

　　试剂

　　DMEM，不同批号的血清，胰m，双抗

　　实验步骤

　　1.取HeLa细胞和Mel细胞(本来应该取正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞，但是实验室条件有限，本组做HeLa细胞)，胰m消化后，用无血清培养基(事先加双抗)吹打成细胞悬液(避免以前血清的干扰)。计数。

　　2.取4000个左右的HeLa细胞加入到每行的*孔(在加之前要震荡培养基)。本实验经计数后应加11μL细胞。

　　3.在A和H行中*孔加入89μL含标准血清(2004.12)的培养基。(对照组)

　　4.在A和H行中每一孔中加入100μL含标准血清的培养基。

　　5.将*孔中的液体吸100μL至第二孔，从第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。zui后的100μL弃掉。这样就形成了从*个孔到zui后一个孔的细胞梯度从大约2056，1028等至1个。(要吹细均匀)

　　6.每个孔再补加100μL含标准血清的培养基。这可以保证孔中的营养物质。

　　7.在B行采取同样的方法。白介素ELISA试剂盒不同的是用含有需筛选的批号为011217血清代替标准血清。

　　8.在C至G行采用同样的方法。血清批号分别是030224，040528，040830，041012，041016。

　　9.将96孔培养板放入CO2 培养箱37℃培养一周。

　　10. 培养结束后，观察细胞生长的情况。比较在同一细胞浓度下的不同学清对细胞生长的影响。在同一细胞浓度下细胞生长数zui多的培养基所含有的血清即可作为被选择的血清样品。

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