大鼠ELISA试剂盒实验中误差的解决办法及实验条件的选择
 

　　大鼠ELISA试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。ELISA试剂盒试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

　　大鼠ELISA试剂盒如果您在实验过程中犯了以下几个小错误的话也会出现实验误差的!

　　1.做实验时少说话，防止唾液掉进酶标条中。

　　2.加入一抗二抗需要放入37°。

　　3.如果同时做多个板子，多个板子别罗一起;尽量少用排枪。

　　4.加样时，由低浓度向高浓度加，这样减少跳孔的几率。

　　5.勤换枪头。

　　一 移液器的使用，加样(抗体)等需要准确定量的试剂时不使用排枪，经验证明排枪很不准确，极易跳孔，不要图便宜买低档的tips 因为ELISA不但会放大被检测的目的蛋白，也会放大非特异结合的杂质蛋白。

　　二 倍比稀释样品时，稀释倍数要小于10。

　　三 所有的装跟大鼠ELISA试剂盒相关试剂的容器，玻璃制品的要干烤过或者使用一次性的树脂容器。

　　在大鼠ELISA试剂盒实验中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

　　(1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙x、聚苯乙x、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙x凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　(2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，大鼠ELISA试剂盒时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

　　(3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

　　(4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。大鼠ELISA试剂盒底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

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