细胞活性定磷比色法定量检测试剂盒实验步骤

　　实验开始前，将-20℃冰箱里的ELISA试剂盒中的试剂溶液放进冰槽里融化。然后进行下列操作。

　　一、 样品准备

　　1. 准备好 25cm2细胞培养瓶或 60mm细胞培养皿的待测培养细胞(5 X 106细胞)

　　2. 小心加入 xx 毫升预冷的 SBJ 清理液(试剂 A)，覆盖生长表面

　　3. 小心抽去清理液

　　4. 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞

　　5. 加入 xx 毫升 SBJ 清理液(试剂 A)，混匀细胞

　　6. 移入到预冷的 15 毫升锥形离心管(注意：悬浮细胞从这一步骤开始)

　　7. 放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

　　8. 小心抽去上清液

　　9. 加入 xx 微升S B J 裂解液(试剂 B)，充分混匀

　　10.转移到预冷的 1.5 毫升离心管

　　11.强力涡旋震荡 15 秒

　　12.置于冰槽里孵育 30 分钟

　　13.放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g(或 13000RPM)

　　14.小心移取 500 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管

　　15.移取 2 微升进行蛋白定量测定

　　16.即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

　　二、细胞活性定磷比色法定量检测试剂盒测定准备

　　1. ELISA试剂盒准备好待测样品(例如细胞裂解萃取液等)，置于冰槽里(注意：样品须澄清)

　　2. 设定好分光光度仪(温度为 30℃)：波长为 660nm，并置零

　　3. 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管

　　4. 按下表分别加入S B J 阴性液(试剂 D)和 SBJ标准液(试剂 H)到每个离心管， 混匀.

　　5. 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照;标准管浓度见下表：

　　管号 SBJ阴性液(试剂 D) SBJ 标准液(试剂 H) 测定体系标准磷浓度

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