绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

　　本试剂盒仅供研究使用。

　　检测范围：

　　使用目的：

　　本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)含量。

　　实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)水平。用纯化的绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Ⅱ型胶原(ColⅡ)，再与 HRP标记的Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)浓度。

　　试剂盒组成：

　　绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶联免疫分析标本要求

　　1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2.不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步骤：

　　1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

　　配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用

　　洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。

　　加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

　　温育：操作同 3。

　　洗涤：操作同 5。

　　显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应(此时蓝色立转)。

　　11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

　　操作程序总结：

　　计算

　　以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　绵羊Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)酶联免疫分析注意事项

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内，如标本数量多，推选使用排枪加样。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔*孔的 OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　保存条件及有效期

　　1.试剂盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6个月

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