人促甲状腺素释放激素ELISA试剂盒操作实验原理

　　人促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人促甲状腺素释放激素(TRH)水平。用纯化的人促甲状腺素释放激素(TRH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入促甲状腺素释放激素(TRH)，再与HRP标记的促甲状腺素释放激素(TRH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的促甲状腺素释放激素(TRH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人促甲状腺素释放激素(TRH)水平。

　　ELISA试剂盒优势：

　　1、、灵敏、特异的抗体

　　2、稳定的重复性和可靠性

　　3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体

　　4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型

　　5、种属齐全：人(Human)、大鼠(Rat)、小鼠(Mouse)、猴(Monkey)、兔(Rabbit)、猪 (Pig)、马(Horse)、鱼、鸡、鸭、羊等等

　　6、可检测指标齐全：细胞因子检测、心肌梗塞检测、内分泌检测、肝纤维化检测、自身免疫检测、肿瘤标志物检测、传染病检测、特种蛋白检测、优生优育检测等等。

　　人促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒操作步骤：

　　1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180U/mL, 120U/mL , 60U/mL, 30U/mL,15 U/mL)。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同3。

　　8. 洗涤：操作同5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

　　人促甲状腺素释放激素试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒