ELISA实验干货丨如何选择试剂盒

　　要问科研最怕遇到的糟心事，非买到科研试剂莫属了，用不好的试剂无非导致两种结果：实验失败or被动学术造假。ELISA试剂盒门槛较低，制假相对简单，常有不法商家打着种属全、指标全、现货供应的旗号来生产、销售坏ELISA试剂盒，曾有老师吐槽“每个月都能收到好几个从未听过的厂商向我ELISA试剂盒"。针对ELISA试剂盒真假问题，我们整理了一些辨别经验(购买前and购买后)，希望对大家有所帮助。

　　购买前

　　1.选择正规公司

　　进口试剂盒尽量选择Thermo、 R&D等公司;国产试剂盒一定要选择大型正规企业，比如联科生物。将“厂家名"、“ELISA"和“假货"等关键词在网上搜索，有的网站或论坛如丁香园等会有打假曝光平台。正规厂商的ELISA试剂盒通常有技术发明支撑和ISO9001国际质量体系认证，且厂家会定期收集整理试剂盒的文献引用情况，购买前可向厂家索要相关材料加以核实。

　　2.试剂盒性能参数

　　向厂家索要或从其下载产品说明书和质控报告，查找ELISA试剂盒的关键质控性能参数：准确度(加标回收率、稀释线性)、精密度(板内差、板间差)、灵敏度、样本值、特异性、校准。如果无法提供这些性能参数数据，则说明试剂盒开发过程不够科学严谨，并未做试剂盒性能测试从而无法得到准确真实的结果，也有极大可能是假货试剂盒。

　　3. 不常见指标的选择

　　如需检测不常见物种的样本(如禽类、猪、羊等)，可选择靠谱的生物网站或好的ELISA试剂盒供应商。其实，“货比三家"有时会有一些“惊喜"，也许你会发现：某个公司的说明书除了指标名称不一致，其他内容基本一样;某个指标，几家公司试剂盒的性能参数是一样…一定要记住：关于网上宣传有所有种属所有指标ELISA试剂盒的公司，那真的是再谨慎也不为过。

　　4. 所有指标常备现货

　　抗体并不十分稳定，针对非热门研究指标，厂家为保证产品质量通常不会长期备现货，若承诺相对冷门的ELISA试剂盒能随时发货，那需谨慎考虑是否要选择该供应商。

　　购买后

　　1.检查

　　检查说明书、包装盒的质量，通常不好伪劣产品为了降低成本，印刷的质量会比较差。其次仔细阅读说明书，如上所示查找ELISA的性能指标。

　　2.实验

　　(1)利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原

　　a. 将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液;

　　b. 37℃孵育15分钟后，代替原试剂盒中的检测抗体;

　　c. 后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物;

　　d. 实验完毕后，检测其标准曲线，如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原，该试剂盒为假货ELISA试剂盒;

　　e. 如果标准曲线无线性，则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰，影响了其实际试剂盒抗体的检测作用，则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。

　　(2)如果购买了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B，利用交叉实验即可鉴别ELISA试剂盒是否造假

　　a. 取出购买的试剂盒A的包被板两条;

　　b. 一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线;

　　c. 另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线;

　　d. 后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物;

　　e. 实验完毕后，检测两条标准曲线，如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B，即该试剂盒为假货ELISA试剂盒;

　　f. 如果两条标准曲线不一致则说明两个ELISA试剂盒检测的不同指标，试剂盒A只能检测A，不能检测B，即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。

　　上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒