ELISA实验条件重要的选择

　　在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

　　(1)固相载体的选择: 许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

　　(2)ELISA试剂盒包被抗体(或抗原)的选择: 将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4C18~24小时。蛋白质包被的合适浓度需进行滴定: 即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/m1等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/m1。

　　(3)酶标记抗体工作浓度的选择: 首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

　　(4)ELISA试剂盒的酶的底物及供氢体的选择: 对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H202在临用前加入。

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