细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒产品说明书

　　主要用途

　　细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老(replicative senescence)的分子特征来识别和探测衰老细胞的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞或活体内(in vivo)检测。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感，堪称上同类产品zui为上佳。

　　技术背景

　　细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。

　　产品内容

　　清理液(Reagent A)毫升

　　固定液(Reagent B)毫升

　　酸性液(Reagent C)毫升

　　稀释液(Reagent D)毫升

　　染色液(Reagent E)毫升

　　说明书1份

　　保存方式

　　保存 染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里; 稀释液(Reagent D)和 染色液(Reagent E)用铝箔封裹，避免光照;有效保证6月。

　　用户自备

　　2毫升离心管：用于配制染色工作液。

　　15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液。

　　恒温培养箱：用于染色孵育。

　　光学显微镜：用于观察染色后的细胞。

　　实验步骤：

　　操作一、25cm2细胞培养瓶染色

　　实验开始前，将试剂盒里的 染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀释液(Reagent D)到2毫升离心管，加入xx微升 染色液(Reagent E)，混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为 染色工作液。然后进行下列操作：

　　小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液。

　　小心加入xx毫升 清理液(Reagent A)，清洗生长中的细胞表面。

　　小心抽去清理液。

　　小心加入xx毫升 固定液(Reagent B)，覆盖整个生长表面。

　　在室温下孵育5分钟。

　　小心抽去固定液。

　　小心加入xx毫升 酸性液(Reagent C)，清洗细胞表面。

　　小心抽去酸性液。

　　重复实验步骤7和8一次。

　　小心加入xx毫升 染色工作液，覆盖整个细胞表面。

　　放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色(注意：避免液体蒸发)。

　　在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。

　　操作二、24孔细胞培养板染色

　　实验开始前，将试剂盒里的 染色液(Reagent E)从-20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀释液(Reagent D)到15毫升锥形离心管，加入xx微升 染色液(Reagent E)，混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为 染色工作液。然后进行下列操作。

　　1.小心抽去24孔细胞培养板里的培养液。

　　2.每孔加入xx微升 清理液(Reagent A)，清洗生长中的细胞表面。

　　3.小心抽去每孔里的清理液。

　　4.每孔加入xx微升 固定液(Reagent B)，覆盖整个生长表面。

　　5.在室温下孵育5分钟。

　　6.小心抽去固定液。

　　7.每孔加入xx微升 酸性液(Reagent C)，清洗细胞表面。

　　8.小心抽去酸性液。

　　9.重复实验步骤7和8一次。

　　10.每孔加入xx微升 染色工作液，覆盖整个细胞表面。

　　11.放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色(注意：避免液体蒸发)。

　　12.在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。

　　注意事项

　　本产品为100次(4个24孔板)或20次(20个25cm2细胞培养瓶)操作

　　操作时，须戴手套

　　本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到*化

　　使用时，避免污染母液，否则出现絮状沉淀，影响实验效果

　　染色工作液避免光照

　　细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性;细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24小时

　　细胞染色zui长孵育时间为24小时

　　孵育时避免液体蒸发

　　本产品染色敏感，甚至对于微弱表达的酶活性仍然显色清晰;用户可以根据实际情况调整孵育时间和染色工作液浓度，使染色恰到好处细胞呈现蓝色的部位为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方染色后的细胞样品可以在4℃冰箱里保存，同样须避免光照。

　　本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：

　　操作容器建议处理液规格：

　　载玻片100微升

　　载玻片培养皿1毫升

　　35mm培养皿1毫升

　　96孔培养板100微升

　　48孔培养板200微升

　　24孔培养板500微升

　　12孔培养板1毫升

　　6孔培养板2毫升

　　25cm2细胞培养瓶3毫升

　　本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

　　细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒