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古朵快讯:ELISA试剂操作常见问题及解决方案
更新时间:2023-12-01   点击次数:630次

    ELISA试剂操作常见问题及解决方案


    一、为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?

    温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应,实验前务必将所有试剂平衡至室温,包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA试剂盒检测结果的不准确。

    二、如何获得良好线性的标准曲线?

    按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心,收集粉末;确保标准品溶解和混匀(大约10min),然后再进行后续的系列稀释步骤,确保每一步都充分混匀且移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。

    三、ELISA实验为什么必须设置复孔?

    为获得准确的实验结果,强烈建议标准品及样本进行复孔检测。因为复孔检测可以:

    计算平均值,确保实验结果准确;解决实验中误操作造成的跳孔现象;

    计算CV值,对实验的操作和试剂盒的度进行评估。

    四、为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?

    振荡孵育使反应充分,振荡洗涤使背景干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。

    孵育过程振荡,可以加快、加强抗原抗体分子间的相互碰撞接触,使得反应过程加,OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡,可以使洗板干净,在很大程度上 能降低背景值,同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

    五、何时终止ELISA反应?

    ELISA实验终需要酶催化底物显色反应来完成,在佳时间终止反应是ELISA试剂盒实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反应系统中,S5出现淡蓝色,S1 – S3有明显的阶梯型蓝色,便需要终止反应;或者根据高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定,OD620=0.9-0.95之间时即可终止。

    六、为什么酶标仪读数时必须选用双波长?

    首先,酶标仪使用前务必预热10-15min,使测读结果稳定。其次,ELISA实验采用双波长测定吸光度,可以排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度,干扰色等)。一般采用大波长作为参照波长,在参照波长下,检测物的吸光值小,检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收;因此,双波长测定,可大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差,以保证实验数据的准确度。

    ELISA试剂 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。

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