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ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)说明书

点击次数:103 发布时间:2019/12/30
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中文名称: ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
英文名称:Diethyl 2,5-di(thiophen-2-yl)terephthalate
分子式:C20H18O4S2
分子量:386.48
保存:4℃,6个月
规格:100ml
用途:去除细胞悬液中的红细胞,属于溶解红细胞方法的一种无菌溶液。
注意无菌操作,经过滤除菌处理。


【操作步骤】
A、组织细胞样本的常规操作
1、制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解:加入3~5倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。
3、离心:4℃,400~500g离心5min,弃红色上清。如无低温离心机本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤:根据具体实验要求加入适量PBS、HBSS、生li盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。4℃,400~500g离心2~3min,弃上清,离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生li盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。
6、如有必要,重复上述步骤5一次,共洗涤1~2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。


B、组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)
1、制备细胞悬液:新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。
2、裂解:加入细胞5倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~2min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。
3、加入15~20ml的 PBS、HBSS、生li盐水或无血清培养液,轻柔混匀。
4、离心:4℃,400~500g离心5min,弃红色上清,本步骤亦可在室温下操作。
5、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2~4各一次。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。


C、血液样本的常规操作
1、取新鲜抗凝血,400~500g离心5min,离心弃上清。
2、裂解: 加入6~10倍细胞沉淀体积的ACK Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解1~5min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。(特别提醒:对于鼠的血液,裂解1~2min已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4~5min,并且裂解过程中轻轻摇动以促进红细胞裂解)
3、离心:4℃,400~500g离心5min,弃红色上清。如无低温离心机本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。
5、洗涤:根据具体实验要求加入适量PBS、HBSS、生li盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。4℃,400~500g离心2~3min,弃上清,离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生li盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。
注意: 对于微量或少量的血液样本,可以不用第1步操作,加入10倍血液体积的ACK Lysis Buffer进行第2步操作,并在4℃或室温裂解4~15min。对于鼠的血液,裂解4~5min已经足够;对于人的外周血,宜延长裂解时间至10min,但通常不宜超过15min,并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。


D、血液样本的快速操作(无需洗涤)
1、新鲜抗凝血中加入10倍体积的ACK Lysis Buffer,轻轻吹打混匀,裂解4~15min。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。(特别提醒:对于鼠的血液,裂解4~5min已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10min,但通常不宜超过15min,并且裂解过程中宜适当摇动以促进红细胞裂解。
2、加入20~30ml PBS、HBSS、生li盐水或无血清培养液,轻柔混匀。
3、400~500g离心5min,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。
5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。

 
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