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ATPase染色液(钙钴法)操作步骤

点击次数:95 发布时间:2020/1/14
提 供 商: 上海古朵生物科技有限公司 资料大小:
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资料类型: OCX 浏览次数: 95
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产品名称:ATPase染色液(钙钴法)
规格:5×50ml
保存:4℃,避光,6个月

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase,ATPase)是一种水解酶,是催化ATP合成的一种酶。三磷酸腺苷酶根据所用激活剂、抑制剂以及酶定位的不同分为膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、线粒体三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷为磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸与磷酸之间的高能键,因而释放大量能量。其催化反应如下:A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量
ATPase染色(钙钴法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷为二磷腺苷和磷酸,磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀,再依次被置换为磷酸钴和硫化钴,zui终产物为黑色硫化钴沉淀。
 



产品组成:
名称:Storage
规格:5×50ml    
试剂(A): 钙盐溶液         50ml        RT 避光   
试剂(B): ATPase孵育液        50ml        4℃ 避光   
试剂(C): 硝酸钴溶液        50ml        RT    
试剂(D): 中性福尔马林        50ml        RT    
试剂(E): ALP硫化溶液         2×1ml        RT 避光   
试剂(F): ATPase对照液         10ml         4℃ 避光    
使用说明书        1份    
 

自备材料:
1、 蒸馏水
2、 恒温箱
 

操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色
1、 石蜡切片脱蜡后,入蒸馏水。
2、 入钙盐溶液中,37℃温箱5min。
3、 入ATPase孵育液,孵育2~4h。
4、 蒸馏水洗1min。
5、 入硝酸钴溶液5min,入蒸馏水。
6、 入中性福尔马林,室温固定2min。
7、 流水冲洗2min。
8、 在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为ALP硫化
工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育2min。
9、 流水洗10min后,入蒸馏水。
10、 石蜡切片经95%乙醇溶液及无水乙醇脱水。
11、 二甲苯透明,树胶封片。
 

(二)冰冻切片染色
1、 冰冻切片直接入蒸馏水。
2、 入钙盐溶液中,37℃温箱5min。
3、 入ATPase孵育液,孵育40min。
4、 蒸馏水洗1min。
5、 入硝酸钴溶液5min,入蒸馏水。
6、 入中性福尔马林,室温固定2min。
7、 流水冲洗2min。
8、 在上述过程中配制ALP硫化工作液,即取试剂(E)用蒸馏水稀释50倍, 即为ALP硫化
工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育2min。
9、 流水洗10min后,入蒸馏水。
10、 甘油明胶封固。
 

染色结果:
酶所在阳性部位        黑色硫化钴沉淀    
 
 
阴性对照(可选):
1、取对照切片,用试剂(F)-ATPase对照液进行孵育,并与用ATPase孵育液孵育的切片进
行比较。两者反应相同部位可能有非特异性磷酸(单酯)酶存在,两者不同部位才是ATP酶活
性所在。
2、将切片入80℃蒸馏水10min,再与其他组织切片同时孵育,结果应为阴性。
 

注意事项:
1、 ALP孵育液、ALP硫化液易失效,分成小分储存,一经开启立即使用。
2、 ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,应小心操作。
3、 对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。

 
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