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硝酸还原酶(NR)检测试剂盒(活体微板法)说明书

点击次数:308 发布时间:2020/4/26
提 供 商: 上海古朵生物科技有限公司 资料大小:
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资料类型: OCX 浏览次数: 308
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产品名称:硝酸还原酶(NR)检测试剂盒(活体微板法)
规格:100T
分类:酶类检测
储存条件: 4℃,避光,6个月
产品用途:主要用于检测植物样本、血清等中硝酸还原酶活性,尤其适用于植物体内硝酸还原酶的活力,用活体样品直接反应,然后测反应液的酶活性。
注意事项:活体法步骤简单,适合快速、多样本的测定。离体法操作相对复杂,但重复性好。

产品优点如下:
1、快速简便:全程约30分钟,可测50例左右样本。
2、取样量微:本法取样量50ul-100ull即可
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
4、再现性好:变异系数CV=1.7%。
5、回收试验: X =99%。
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
 


常见问题以及解决方法:
1、试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻;
2、加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理;
3、洗板时容易造成误差: 因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动;
4、显色问题: 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况;
5、终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒;
6、读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净;
7、严格按照说明书操作。

操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第1、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第1、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第1孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后38分钟以内进行。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

 

 
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