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产品名称:细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法) 储存条件:-20℃,避光,有效期12个月 用途:检测细胞自噬 简介:自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC+)是一种荧光色素,是嗜酸性染色剂,通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法),适用于培养细胞的自噬染色,又称为MDC染色液,可与EB合用双染。
操作步骤(仅供参考): (一)、MDC单独染色: 1、用去离子水稀释1×Wash+buffer至1×。 2、离心,收集细胞,用1×Wash+buffer清洗细胞1次,弃上清。 3、加入适量的1×Wash+buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/ml。 4、取适量细胞悬液至新的EP管中,加入MDC+Stain,轻轻混匀。 5、室温避光染色。 6、离心收集细胞,用1×Wash+buffer清洗细胞2次,弃上清。 7、加入Collection+buffer重悬细胞,滴加于载玻片上并加盖玻片。 8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm,阻断滤光片波长512nm),计数并拍照。
(二)、与EB双染色: 1、用去离子水稀释1×Wash+buffer至1×。 2、离心收集细胞,用1×Wash+buffer清洗细胞1次,弃上清。 3、加入适量的1×Wash+buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/ml。 4、取适量细胞悬液至新的EP管中,分别加入MDC+Stain和EB染色液,轻轻混匀。 5、滴加于在玻片上,室温避光染色,加盖玻片。 6、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm),计数并拍照。
染色结果: 正常细胞 细胞被均匀染成黄绿色细胞 凋亡细胞 染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒 注意事项: 1、MDC Stain和EB,试剂有一定毒性,请小心操作。 2、吖啶橙染色常与EB染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 3、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。 4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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