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黏蛋白染色液(温和甲基化法)操作步骤

点击次数:257 发布时间:2021/6/21
提 供 商: 上海古朵生物科技有限公司 资料大小:
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资料类型: OCX 浏览次数: 257
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中文名称:黏蛋白染色液(温和甲基化法)
产品规格:2×50mL
用途:区分黏蛋白中酸性基团:羧基和硫酸根
注意事项:酸性甲醇与阿利新蓝联合使用,碳水化合物含有羧基呈阴性,出现任何着色则意味着含有硫酸根。
储存条件:4℃,避光,12个月

产品说明:黏蛋白染色液(温和甲基化法)属于化学修饰和阻断法的一种,其原理是利用酸性醇溶液消除COOH的嗜碱性。
Alcian染色液pH值为2.5时,组织内的羧基电离,带有一个负电荷,与阿利新蓝中的阳离子形成盐键,使带有羧基的组织(如蛋白多糖/透明质酸以及上皮酸性黏蛋白)染色,主要用于鉴别黏蛋白中的酸性基团。

自备材料:系列乙醇、恒温箱、蒸馏水、去离子水

操作步骤(仅供参考):
1.两张阳性对照片和两张实验切片均脱蜡至水。
2.将一张阳性对照片和一张实验片入酸性醇溶液,37℃孵育4h。另外的一张阳性对照片和一张实验片仅用去离子水37℃孵育4h。
3.流水冲洗5min。
4.Alcian染色液染色15-30min。
5.流水冲洗。
6.梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。


染色结果:
未处理的硫酸黏蛋白、硫酸蛋白多糖、唾液粘蛋白、透明质酸   蓝色
处理后的切片    淡蓝色
注:处理后的残存的任何颜色都是由于存在硫酸黏蛋白和(或)硫酸蛋白多糖。


注意事项:
1.处理时间超过4h有可能导致硫酸根水解。
2.需要阳性对照片以便验证甲基化程序的有效性。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操

 
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