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中文名称：台盼蓝染色液(0.4%)
英文名称：Trypan Blue Stain solution,0.4%
CAS：72-57-1
分子式：C34H24N6O14S4Na4
分子量：960.81
产品规格：50mL|100mL
用途：又称锥虫蓝染色液，用于细胞染色，细胞计数
储存条件：4℃，12个月

简介：台盼蓝（Trypan Blue），一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（活细胞呈透明无色）和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝（合适浓度）还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。

本品为溶于生理盐溶液的0.4%（w/v）台盼蓝染色液，以无菌形式提供，细胞培养级别。

使用方法：
1.对于悬浮细胞，离心收集细胞，充分清洗后，用适当缓冲液如PBS，HBSS重悬制成单细胞悬液；对于贴壁细胞，先用胰酶消化细胞，再按照悬浮细胞的方法制备单细胞悬液。

2.取0.5ml单细胞悬液，按照:比例与0.5ml 0.4%台盼蓝染色液充分混匀，室温染色3~0min。
【注】：因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。
【注2】：若细胞密度比较高，可取0.2ml单细胞悬液，经适当缓冲液稀释到0.5ml，之后再用0.5ml 0.4%台盼蓝染色液染色。

3.取少量上述染色细胞加入血细胞计数板，于显微镜低倍镜下计数，分别计算着色细胞（即损伤细胞和死细胞）和总细胞。
【注】：用移液枪加染色细胞时，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其*覆盖住整个小室。不可过量加液或者不足量。
【注2】：mm2方格内细胞数通常控制在20-50 cells，当细胞数超过200个，需重新调整稀释倍数。

4.按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，
a，计算每ml细胞数目：Cells/ml=mm2大方格内的平均细胞数×稀释倍数×04；
【注】：此时的稀释倍数为：步骤2所取的单细胞悬液与台盼蓝染色液混合后的稀释倍数
b，总细胞数目：Total cells=（Cells/ml）×最初制备单细胞悬液的总体积
c，细胞活力值：Viability（%）=（总细胞数-总着色细胞数）/总细胞数×00
【注】：通常情况，健康的对数期培养细胞，活细胞至少占到95%。

注意事项：
1、悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD 值可能随时间而变。
3、MTT 溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT 溶液在4℃或较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。