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小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒操作步骤

点击次数:79 发布时间:2019/4/15
提 供 商: 上海古朵生物科技有限公司 资料大小:
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中文名称:小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA kit
供应商:古朵生物
反应时间:1-5h
所需样本体积:50-100ul
检测波长:450nm
研究领域:炎症研究、神经生物学、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。
注意要点:请仔细阅读产品的详细使用说明,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果.


酶联免疫技术在科学实验的应用:
1)酶联免疫组织化学技术用于组织细胞上抗原、抗体成分的定位。
2 测定法用来检测液体中可溶性的抗原、抗体成分。
3)酶联免疫技术中的竞争法是测定小分子抗原的方法。尤其适用于食品卫生分析。食品卫生分析中所需测定的物质大都是低分子质量的,但免疫动物产生抗体的抗原其相对分子质量要求必须很大(至少50 000),因此,首先必须将小分子物质结合上高分子蛋白质,才能作免疫之用,而为了能使小分子物质结合上高分子蛋白质,则必须在小分子物质上导人一个活性基团,同时直接竞争法所需的酶标抗原的制备也需首先在小分子物质上导人一个活性基团。


由于该化学修饰反应有一定的技术难度,有关专家就采用了间接竞争法来改进测定步骤,用酶标抗体代替了酶标抗原,因为酶标抗体的制备技术相对比较成熟,并有现成的商品,然而这却使整个实验操作过程不如直接竞争法那么简便快捷。
竞争酶联免疫吸附分析法有特异性强、干扰小、样品的预处理简便、快速、的特点,并且对设备装置的投资较少。


小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒 注意事项:
1. 标本的采取和保存
可用作 ELISA 测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分 ELISA 检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血kuai收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在 ELISA 中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以 HRP 为标记的 ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性 HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法 ELISA 中可使本底加深。一般说来,在5 天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。

 

2. 试剂的准备
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA 中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用 pH 计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

 

3. 加样
在 ELISA 中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在 LEISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法 ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其中加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡 1 分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。

 
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