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人白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒操作步骤

点击次数:78 发布时间:2019/5/16
提 供 商: 上海古朵生物科技有限公司 资料大小:
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中文名称:人白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒
英文名称:Human Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA Kit
供应商:古朵生物
规格:96T/48T
性状:液体
存储:4℃保存6个月
运输方式:快递发货
检测标本:血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清,组织匀浆等
检测方法:双抗夹心法


人白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒 的生物素标记抗体的稀释原则:
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

 

样品的收集、处理及保存方法:
1、血清→操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、血浆→EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液→1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆→将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、保存→如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。


操作步骤:
1.实验之前准备好所有的标准品(见备用试剂)。建议所有的标准和样本都做复孔。
2.首先把微孔板固定在支架上,分别设好相应的孔(空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔),然后在包被板上,标准品和代测样本孔准确加样50μl
3.加10 μL的生物素到代测样本孔中。(标准孔不加)
4.每孔加入酶标试剂50μl,混合,混合在这一步是很重要的。封板后置37℃温育1个小时。
5.在温育结束前15分钟内准备显色液。(见备用试剂)
6.用下面的一种方法洗板;
7.手洗:将微孔板中的混合物倒入合适的废物器皿中,然后每孔注满稀释好的洗涤液,再到掉,如此重复4次,然后倒置微孔板,将其拍到吸水纸上或者纸巾上,直到拍干。、
(注:洗板的时候要紧握微孔板的两侧,以确保所有的板条不脱落)
8.机洗:吸干所有的孔,然后用洗板机洗板5次,调整洗板机尽可能洗掉所有的液体,设置填充量在350微升/孔/清洗(范围:350-400微升),洗板后,倒置微孔板,将其拍到吸水纸上或者纸巾上,直到拍干。建议洗板机设置的浸泡时间为10秒,震动时间为5秒。
9.每孔依次加入显色剂A 50μl,显色剂B 50μl,封板后置20-25°C显色15分钟.
10.每孔加终止液50μl混合

 
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