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血红素抗体/Heamachrome操作步骤

点击次数:7 发布时间:2019/8/5
提 供 商: 上海古朵生物科技有限公司 资料大小:
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抗体名: 血红素 / 血红素抗体
抗体英文名: Heamachrome/Heamachrome antibody
应用范围: WB=1:100-500ELISA=1:500-1000IHC-P=1:100-500IHC-F=1:100-500IF=1:100-500(石蜡切片需做抗原修复)
宿主: Rabbit
供应商:古朵生物
抗原来源: 详情参见说明书
保质期: 见说明书
适应物种: Human,
标记物: HRP,Biotin,Gold,FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7,PE,Alexa Fluor 350,Alexa Fluor 7816,apc各标记物详情询
克隆性: 单克隆
保存条件: 低温
形态: Lyophilized or Liquid
亚型: IgG
免疫原: Full length Heamachrome protein


抗体,也叫免疫球蛋白 (Ig),是一种能特异性结合抗原的糖蛋白,而抗原是在易感染动物体内引发抗体产生的物质。在体内,抗体是由于外 源性分子的侵袭而产生的。抗体以一个或者多个 Y 字形单体存在,每个 Y 字形单体由 4 条多肽链组成,包含两条相同的重链和两条相同的轻 链。轻链和重链是根据它们的分子量大小来命名的。Y 字形结构的顶端是可变区,为抗原结合部位。
任何一个抗体的轻链都可以分为κ或λ型(基于小分子多肽结构上的差异),每一个抗体的重链则决定了它的类或型。抗体制备是指通向抗体生成的步骤,包括抗原样品的制备以及将其安全注入实验动物或家畜体内,并由此诱发抗原特异性抗体在血清内达到高表达水平,然后可从该动物体内回收抗体。


抗体交联法:
⑴ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将铁蛋白稀释成20mg/ml~25mg/ml。
⑵ 以1︰1000(W/W)的比例加入XC液室温搅拌45min,离心去沉淀。
⑶ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将提纯lgG配成5mg/ml,以1︰4的比例(V/V)加入IgG与铁蛋白-XC液,4℃搅拌48h。
⑷ 以0.1Mol/L碳酸铵溶液透析过夜,以除去多余的异氰酸盐,再以0.05Mol/l pH 7.5 PBS透析,使pH值恢复到生理水平。
⑸ 超速离心 以1.00×105g离心5h,去上清,沉淀以0.05Mol/L PBS悬浮,再次离心,以除去未结合的IgG。
⑹ 以血清学及免疫学方法测定结合抗体的特异性、免疫活性以及标记效应,如果操作步骤严格,结果是满意的。


单抗原理:
抗体主要由B淋巴细胞合成。每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成多克隆,并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体,称为单克隆抗体。


单抗的制备过程:
1.动物免疫:注射特定抗原蛋白
2.分离脾淋巴细胞:与培养好的骨髓瘤细胞混合,人工诱导细胞融合。
3.细胞融合:淋巴细胞杂交瘤的制备
4.杂交瘤细胞的筛选:HAT选择培养基筛选出杂交瘤细胞。
5.培养杂交瘤细胞:体外培养杂交瘤细胞,从培养液中分离提取单克隆抗体。或者,将杂交瘤细胞移植到小鼠腹腔内,从小鼠腹水中分离提取单克隆抗体。
6.单克隆抗体的制备和冻存、纯化

 

 
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