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大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒技术说明

点击次数:139 发布时间:2019/9/16
提 供 商: 上海古朵生物科技有限公司 资料大小:
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产品名:大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒
英文名称:Rat Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA Kit
产品规格:48T/96T
产品产地:进口/国产
检测方法: ELISA酶联免疫法
检测波长:450nm
研究领域:炎症研究、神经生物学、新陈代谢、信号通路、免疫学。
测试种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、猪、鸡、鸭elisa试剂盒等种属
保存条件:2~8℃,zui佳温度6摄氏度,有效期6个月。
用途:主要用于科研方面,不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。

 

大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生li盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 


大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒技术原理及自备设备:
ELISA技术原理是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒自备设备有,蒸馏水,加样器,振荡器及磁力搅拌器,酶标仪,量筒,烧杯,吸水纸,坐标纸,温育箱,洗瓶,一次性试剂管,微移液及其吸嘴等。


注意事项:
实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
若显色过浅,可适当延长底物温育时。
标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
冻结标本溶解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠混合,不要在混匀器上强烈震荡。
浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。
反复冻融会使蛋白效价降低,所以代测样本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。

 

操作步骤:
(1)双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法。夹心法利用两种一抗对目标抗原进行捕获和固定,在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性,该方法的检测灵敏度可提高到pg级的水平。将已知抗体包被到固相表面,加入待检标本,标本中若含有相应抗原即与固相表面的抗体结合,洗涤去除未结合成分,加入该抗原特异的酶标记抗体,洗去未结合的酶标记抗体,加底物后显色。若标本中无相应抗原,固相表面即无抗原结合,加入的酶标记抗体则不能结合于固相并被洗涤去除,当加入无色底物后,因无酶催化故不显色。双抗体夹心法适用于测定2价或2价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
(2)间接法是检测抗体zui常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。先将待测的蛋白包被在孔板内,然后依次加入一抗、酶标记u akn 的二抗和底物显色,通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原。这种方法操作简单但由于高背景而特异性较差,目前已逐渐被夹心法取代。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标二抗建立检测相应抗体的方法。间接法成功的关键在于抗原的纯度。间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。
(3)竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被于固相。如抗原中有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质,然后再加入标本和酶标抗体进行竞争结合反应。小分子抗原或半抗原因缺乏可用于夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,zui后的显色也愈浅。

 
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