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【中文名称】：大鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒Kit价格说明书
【英文名称】：Ratisletcellantibody,ICAELISAKit
【产品规格】:96T/48T。
【保存条件】：2-8℃低温保存
【保质期】：6个月，所有试剂盒均提供批次

试剂盒组成：
封板膜:2片（48）/2片（96）
说明书:1份
密封袋:1个
标准品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存
样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存

样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作注意事项：
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

操作步骤：
1. 取出试剂盒，于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。
2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的样品，空白对照加入50μl的蒸馏水；
4. 在样品孔中加入10μl的生物素；(不含空白对照孔,切忌：生物素只加样品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液；(不含空白对照孔)
6. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1小时；(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)
7. 充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；(浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释)
8. 酶标板洗涤后用吸水纸*拍干；
9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl；(不含空白对照孔)
10. 20-25℃下避光反应15分钟；
11.各孔加入50μl终止液，终止反应；