实验方法原理 :   

RNA 提取过程中应注意的是：组织或细胞在变性液中*裂解的同时，如何抑 RNase 引起的 RNA 降解问题。在直接加工新鲜组织时，所有的细胞能尽可能快的接触变性剂以*裂解这一步是相当重要的。一些难以加工的组织，例如：坚硬的肿瘤、细菌细胞、植物根部等，即使使用匀浆器一般也不能很有效的裂解。此时，通常可以在处理组织时，先对其进行冷冻处理，以使之充分裂解。

为使迅速冷冻样品，以使整块组织*冷冻，因此，在冷冻前应先将组织切成小块，然后将其浸没于液氮中。这将会使组织块以快的方式冷冻。另外，也可将一个金属盘置于干冰上作为冷冻的表面，以对片状的组织进行快速的冷冻。

下面三种力法分别描述用三种不同的方式加工 0.lg 冷冻的小鼠肝脏组织，以产生组织/细胞裂解产物。裂解产物可进行 RNA 的提取纯化，或用于估计 pdy(A）+RNA 的产量。虽然这三种方法同是利用胍缓冲液以*裂解细胞，但是它们在先前的步骤中，即如何加工组织或是在如何裂解的过程中有所不同。

实验步骤：

方法一: 在匀浆器中加工冷冻的组织

产量：4.1ugpoly(A)ˉRNA

冷冻的组织在干冰上被切成大约 Cl5 cm2 的小片，转人匀浆器中，一边缓缓加入裂解缓冲液一边不断的匀浆。

方法二：通过注射器加工冷冻的组织。

产量：3.2ugpoly(A)-RNA。

冷冻的组织在干冰被切成大约 0.5 cm2 的小片，一边缓缓加人裂解缓冲液一边通过 18 号的标准注射针头反复抽打十次。

方法三：在液氮中将组织研磨成粉末。

产量：7.1ugpoly(A)ˉRNA。

将冷冻的样品放在研钵中进行剧烈研磨以使其粉碎。当组织被磨成粉状后，向研钵中加人变忭缓冲液，并搅拌均勻。混合物融化后应转移到合适的容器中进行进一步的操作。在液氮中研磨组织至粉末状，细胞的裂解则更*，因此能得到比前两种方法多近一倍的产量。

可见，即使对于 N—种组织，采用同一种试剂进行 RNA 的提取，仅仅由于组织样品处理方法的不同，就导致了 RNA 提取量的显著差异。因此，在对不同的组织进行 RNA 提取时，不仅要选择合适的提取方法，同时也要根据所处理的组织，以及提取目的以选择为合适的组织处理方法，只有这样才能获得效果。