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如何选择PCR实验的耗材?
更新时间:2020-07-01   点击次数:346次

关于其基因组的测序和信息分析,早在两年前就由华大基因、浙江大学和中国科学院的科学家团队共同合作完成。后续功能的验证主要包括PCR检测、ChIP、IP、IHC、IF、FISH等手段。而其中就简单的方式就是PCR验证,那关于PCR实验有哪些影响因素呢?

我们一般想到的可能是获取的DNA/RNA质量、反转录的效率、引物的特异性乃至DNA聚合酶的保真度、扩增长度等问题,但很少有人会想到耗材的选择,可能也会影响您的实验结果。那么关于PCR实验耗材我们改如何选择呢?

首先需要明确的是我们做的是哪种PCR实验。根据检测方法的不同,PCR实验分为普通PCR法和荧光定量PCR法,前者一般是终点PCR跑胶法测定,所以在选择耗材时需要关注的主要是耗材本身的导热性和密封性;而后者是实时检测荧光信号,除了导热性和密封性外,对透光性和避光性也有所要求。换句话而言,可以做荧光定量PCR的耗材一定可以来做普通PCR,反之,效果却会差很多!

确定好了实验类型,我们就可以选择耗材了,如前面所述,我们知道了密封性、导热性、透光性、避光性等因素是我们需要关注的,那为什么要关注这些呢?

 

一、密封性

密封性越好,产物的挥发越少,得到的产物就越多同时气溶胶的产生也越少,对于下一轮实验的污染也就越少,也就意味着假阳性的产生率越低。

二、导热性

导热性越好越均一,PCR的速度就越快,准确度也越高。

三、透光性

这主要是对于荧光定量而言,我们知道它是一种实时定量的方式,那么耗材本身的透光性就直接关系到我们检测到的荧光信号多少,如果选择耗材透光性不足,本该检测到的信号检测不到,那就会造成我们对结果的误判。

四、避光性

这也是针对荧光定量而言的,同上面的因素,如果我们在整个实验过程中没注意避光,带有荧光的试剂过度被消耗,那*直接就会影响我们实验的扩增效率,导致不准确的结果产生。

PCR单管

采用*的一次注塑成型技术,超薄设计,热传导快,视窗比平面低,不易被划擦,管子密封性更好,近乎零蒸发,减少了气溶胶的污染,*大程度避免了假阳性的产生。荧光系列,盖子高度透光,可适用于顶读与低读。

八联管(适用普通PCR)

低于平面的高透-视窗设计,可以*大程度避免被划擦。100%进口的原材料的使用使得管壁具有均一的平整和稳定的不黏壁性,确保了样品处理和吸取时的精准度。

PCR板

不同于市面上其他厂家底部注塑的方式,古朵注塑点是在板面上的孔与孔的交叉处,这样使得PCR板的管底与PCR仪的接触更好,同时采用纯度高达99.9%的聚丙烯,超薄设计、壁厚一致均匀的工艺使得热传导精确、控温准确、有效减少了实验循环时间。

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